產品名稱：人大細胞肺癌細胞H460   

細胞規格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態：現貨

培養液：RPMI-1640+10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復蘇細胞需要1-2周，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質 控：無支原體、無污染、符合標準

研究范圍：僅供科研使用

人大細胞肺癌細胞H460，我司主要經營產品是國內傳代細胞和細胞培養相關的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質血清。常規液體培養基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產品、ELISA 試劑盒等產品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

在細胞體外培養的過程中，離開機體保護的細胞是很脆弱的，在陌生的生長環境下即便是培養條件的輕微改變，也可能對細胞產生無法預估的影響。在原代細胞培養過程中，即使保持培養條件*一致，在傳代過程中，細胞的存活質量也是逐漸下降的。

以人臍靜脈內皮細胞（HUVEC細胞）為例，HUVEC細胞是研究內皮細胞功能的經典體外細胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究內皮細胞功能改變或損傷后其衍生細胞因子對血壓的影響；在腫瘤研究中，主要用于實體瘤中血管生成的研究。然而，HUVEC在傳代培養過程中，其活力是逐漸衰退的，因此細胞傳代多不超過10代。

傳統的細胞培養主要是通過顯微鏡下形態學變化以及傳代培養周期的變化預估細胞生長生存狀態。這種主觀判斷既無法量化，也無法進行統計學分析。因此，目前對細胞存活質量的判斷并沒有準確、客觀的統一標準，并且對體外培養細胞的存活質量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導致實驗結果的不穩定。

體外細胞的有效培養新概念——“細胞質控”。通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷五方面對細胞生長生存狀態進行全fang位的監控。

在這五個方面中，影響大的便是細胞活力，蘇州千舍生物教你如何判斷細胞活力。在體外細胞培養的過程中，細胞總有一些因各種原因而死亡，總細胞中活細胞所占的百分比，即是我們常說的細胞活力。“細胞質控”中基礎的指標便是細胞活力。常見的流式細胞設備及部分細胞計數儀器都可以對細胞進行計數，還可以提供準確、客觀的細胞活力數據，為“細胞質控”提供準確、客觀的統計學依據，細胞活力評估并不困難！

只要滿足以下兩個條件就可以進行細胞活力檢測，正常細胞的細胞膜是完整的。

Propidium iodide（PI碘化丙啶）是一種核酸染料，常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測和流式細胞儀分析。PI不能通過正常完整的細胞膜，故細胞在處于壞死或晚期凋亡時細胞膜被破壞，這時可為PI著紅色，可以用來分辨壞死細胞/正常細胞。

加入另一種可以透過細胞膜的核酸染料，就可以通過兩種染料將活細胞和死細胞區分開。

PI經常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復合物的激發和發射波長分別為535 nm和615 nm。

細胞活力的技術標準界定

應用案例：納米藥物毒性測試

納米藥物的研究是近年來新藥研發的熱點。納米藥物載體篩選的首要標準是檢測其對細胞的毒性。而在細胞毒性測試中，首先要排除的是基底培養過程中產生的死細胞，即“噪音信號”。在對新型納米藥物載體SEONLA的研究中，Zaloga等人認為只有活細胞比例超過90%方可進行細胞毒性研究，細胞質控的重要性由此可見一斑。

細胞毒性的入門級指標是細胞活力。判斷一種物質（化合物、小分子藥物或蛋白質等）對細胞的毒性首先要觀察的是其是否或誘導細胞死亡，即細胞活力的變化。以維生素C為例，研究發現，高濃度維生素C對眼癌細胞Y79 Retinoblastoma Cells具有殺傷作用。文章中，作者以眼癌常用化療藥Melphalan作為對照，對經過處理的細胞活性進行檢測，發現，隨著濃度的升高，維生素C對Y79 Retinoblastoma Cells殺傷作用逐漸增強，并且維生素C對眼癌細胞的殺傷作用優于Melphalan。這一實驗結果為眼癌更安全、更有效的治療方案的提出提供了理論依據。

除了細胞毒性研究，細胞質控在病毒感染或者RNA轉染的研究中也是非常重要的。在這一類研究中，轉染/感染試劑或多或少都會對細胞已有一定殺傷作用。因此，在轉染之前，活細胞需要達到一定的比例才可以保證在轉染之后有足夠數量的細胞進行后續的研究。而這一比例需要實驗條件摸索才能確定。

怎樣算是消化好了呢？不需要把細胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了。

一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，你可以嘗試，準備100%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。

一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液。細胞只要能從基質上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間，等待單細胞懸液出現。

比較難消化的細胞：潤洗方法5min還不能消化，以結腸癌細胞為例，比如HCT15、LS411和KM12細胞，胰酶消化，一般10 cm 培養皿，一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

常規的細胞實驗，受消化影響不是很大：如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數實驗，比如病毒包裝，對細胞代數，對細胞狀態要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數一多，細胞包裝能力就會逐漸下降。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細胞外基質相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯合作用。這里要明白，胰酶切割細胞外基質的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于整聯蛋白的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話），而應該想其它辦法。

PBS洗滌：消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細胞，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細胞房、培養箱&水盤、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好細胞房，帶好手套、口罩、鞋套，防止人為因素污染。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞

NIH/3T3小鼠胚胎細胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞

B16 小鼠黑色素瘤細胞

CT26.WT小鼠結腸癌細胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細胞

F9 小鼠畸胎瘤細胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞

BV2 小鼠小膠質細胞  

DC2.4小鼠樹突狀細胞

U14 小鼠子宮頸癌細胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細胞

mMSC小鼠骨髓間充質干細胞

HL-1小鼠心肌細胞

TM3 小鼠睪丸間質細胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細胞前體細胞

hepa1-6 小鼠肝癌細胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細胞

HT22小鼠海馬神經元細胞系

MC38小鼠結腸癌細胞

mpc5小鼠足細胞

4T1 小鼠乳腺癌細胞

ANA-1小鼠巨噬細胞

TM4 小鼠睪丸支持細胞

STO 小鼠胚胎成纖維細胞

bend.3 小鼠腦微血管內皮細胞

J774A.1小鼠單核巨噬細胞

H9C2 大鼠心肌細胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞

RT4-D6P2T 大鼠神經鞘瘤細胞

INS-1 大鼠胰島細胞瘤細胞

NRK-52E 大鼠腎小管導管上皮細胞

BHK-21 倉鼠腎成纖維細胞

PK-15 豬腎細胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細胞

vero 綠猴腎細胞

Hep3B人肝癌細胞

HPAC人胰腺癌細胞

HT-1376 人膀胱癌細胞

JAR 人胎盤絨毛癌細胞

KNS-89 人腦膠質細胞瘤細胞

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養基 C11995500BT

DMEM低糖培養基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02