無外泌體胎牛血清 FBS050-EXO|WINSERA

名稱：無外泌體胎牛血清

貨號： FBS050-EXO

規格：50ML

品牌：WINSERA

在細胞培養實驗中，胎牛血清（FBS）一直是不能缺少的營養補充劑。然而，傳統FBS中含有大量外泌體，可能干擾實驗結果，特別是在干細胞研究、腫瘤微環境分析及外泌體相關實驗中。蘇州千舍生物科技有限公司推出的無外泌體特級胎牛血清（Exosome-Free FBS），通過超高速離心結合納米過濾技術，有效去除外泌體，確保實驗數據的準確性和可重復性。

關鍵優勢：

高純度：外泌體去除率>99%，避免外源性RNA、蛋白質干擾

高穩定性：批次間差異極小，適用于長期實驗

低內毒素：<1 EU/mL，減少細胞毒性風險

1、培養細胞時，如何去除血清來源的外泌體？    

多數情況下，細胞在體外培時養需要血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清對細胞外泌體的污染，可采用以下兩種方法： （1）將細胞培養用的血清通過100000 g超速離心10h以去除血清外泌體； （2）選擇無血清培養基進行細胞培養。  

2、無外泌體血清培養基（或者無血清培養基）在什么時候使用？    

細胞在正常含血清的培養基中培養一定的時間后，細胞融合度約為60%-70%時，移去原有含血清的培養基，換成新鮮的無外泌體血清培養基（或者無血清培養基），繼續培養24-48h，細胞融合度達到80%-95%左右時收取上清，該上清液即可用于提取外泌體。   

3、細胞培養過程中的死細胞是否會影響外泌體的提取？    會的。在收獲細胞時，應確定死亡細胞占比不超過5%。細胞凋亡/死亡過程中會釋放大量大小不等的囊泡，它們在外泌體的提取純化過程中會污染活細胞產生的外泌體。  

4、準備做細胞外泌體Small RNA的NGS測序，初始樣品量需要準備多少？    普通腫瘤細胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。由于某些細胞（如懸浮細胞、干細胞、神經細胞等）中外泌體含量比較低，建議先通過10kD超濾柱濃縮，準備40mL以上的濃縮液再進行超速離心分離外泌體，一般需提取到20ng以上的Total RNA。  

5、進行外泌體RNA RT-PCR實驗推薦什么內參？    取決于具體樣品，可以選擇外源添加cel-miR-39-3p，或內源U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72作為內參。    

6、提取的外泌體進行Western blot前是否需要加入RIPA試劑裂解？    需要，一般按照1:1的比例加入RIPA試劑。  

7、進行外泌體Western blot鑒定時有無內參蛋白可供選擇？    無，該檢測屬于定性檢測，更多的是用等蛋白定量校準樣品間的差異。

8、組織細胞外泌體如何提取？    無菌環境下將組織剪成小塊（越小越好），然后在無血清的培養基中培養12h；將培養液轉移至離心管中，于4℃以3000g離心20 min去除培養液中雜質和細胞碎片，將上清液轉移至新的離心管中；先使用0.45μm濾器過濾上清液，接著使用0.2μm濾器過濾上清液，再進行超速離心分離外泌體。有條件的話建議采用Transwell小室培養的方式，效果更佳。    

9、如何鑒定提取的外泌體？     

 通常使用透射電鏡檢測（形態）、粒徑檢測（大小）、Western blot檢測等方法鑒定提取的外泌體。在進行Western blot檢測時，通常檢測外泌體標志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101等），按照國際細胞外囊泡協會的建議為檢測2個陽性和1個陰性指標。

10、粘度過大的樣品如何處理？    如果樣品粘度過大時（因細胞分泌物較多所致），可將樣品用1×PBS緩沖液進行等體積稀釋。

11、外泌體電鏡是不是一定要有膜結構？

 負染電鏡結果中外泌體的形態是那種明顯的茶托樣，邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果結構是沒有膜結構的圓球形，很可能是脂蛋白顆粒或者抱團的蛋白質。    

12、分離外泌體前能加RNA保護劑嗎？    分離外泌體前的樣品不能加入任何RNA保護劑（如Trizol）。