A549/吉西他濱細胞培養技巧

更新時間：2025-04-16

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產品名稱：A549/吉西他濱人肺癌吉西他濱耐藥株

種屬：人

組織來源：肺癌

生長形態：貼壁生長

形態特征：上皮細胞

支原體檢測：陰性

細胞背景：該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養建系，患者為58歲人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

培養條件：90%RPMI—1640+10%胎牛血清+100nN吉西他濱

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細胞復蘇是細胞培養中繞不過去的基礎操作，涉及到將液氮冷凍保存的細胞恢復到適宜的生長狀態。

（1）復蘇前將生物安全柜或者超凈工作臺進行紫外滅菌30 min。并將含有10% FBS、1×青鏈霉素（100×）等的培養基、無菌1×PBS（pH 7.2~7.4）進行37℃預熱。

（2）將預熱好的培養基提前加入到10 cm培養皿或細胞培養瓶中，并取4 mL培養基加入到15 mL離心管中。

（3）從液氮罐中取出細胞凍存管，應帶有防護眼睛和手套。迅速放入盛有37℃的水浴中，并不時搖動，盡快解凍。

（4）肉眼觀察全部化凍后，將細胞加入到提前準備好的含有4 mL培養基的15 mL離心管中，并以1000 rpm，離心5 min。用75%酒精擦拭消毒后，移至超凈工作臺上，去除上清，迅速加入1 mL步驟（1）中的培養基，輕輕吹打重懸細胞，然后將細胞全部轉移至10 cm培養皿或細胞培養瓶中。

（5）以上下、左右各輕輕晃動5~10次，進行“十"字法混勻細胞，放置37℃ 5% CO2培養箱中。

（6）次日更換一次培養液，觀察細胞狀態，再繼續培養。

（1）快速解凍：從液氮取出細胞凍存管后，應立即放入37℃水浴鍋中，持續搖晃1~2 min直至解凍，以避免細胞死亡。

（2）稀釋冷凍保護劑：解凍后可用培養基稀釋含有冷凍保護劑（如DMSO）的細胞懸液，以減少其對細胞的毒性。

（3）輕柔處理細胞：在離心和重懸細胞時，應避免劇烈攪拌或離心，以免損傷細胞。

（4）及時換液：復蘇后的細胞應及時換液，一般在12~24 h換液，去除死細胞和代謝廢物，為細胞提供新鮮的營養物質。

（5）使用優質血清：血清的質量對細胞復蘇和生長至關重要，選擇內毒素更低、質量穩定的血清可以提高實驗成功率。

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