細(xì)胞名稱(chēng):DC2.4 小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：WS20099（種屬鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

DC2.4是通過(guò)用表達(dá)鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞CSF (GM-CSF)和myc和raf癌基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)C57BL/6小鼠的骨髓分離物而產(chǎn)生的永生化鼠樹(shù)突細(xì)胞。DC2.4表現(xiàn)出樹(shù)突細(xì)胞的特征，包括細(xì)胞形態(tài)和樹(shù)突細(xì)胞特異性標(biāo)記的表達(dá)，以及吞噬和呈遞MHC類(lèi)和II類(lèi)分子上的外源性抗原的能力。樹(shù)突細(xì)胞(DC)是免疫系統(tǒng)的抗原呈遞細(xì)胞，在大多數(shù)組織中發(fā)現(xiàn)，特別是那些與外部環(huán)境接觸的組織(例如，皮膚和鼻、肺、胃和腸的內(nèi)層)。最早于1973年描述，樹(shù)突狀細(xì)胞的主要功能之一是吞噬外來(lái)病原體，并將加工后的抗原呈遞至幼稚T細(xì)胞，以調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。樹(shù)突狀細(xì)胞還表達(dá)Toll樣受體，并幫助調(diào)節(jié)先天免疫反應(yīng)。盡管它們分布在大多數(shù)組織中，但DC在體內(nèi)數(shù)量很少，并且在體外難以維持。這些困難限制了樹(shù)突細(xì)胞的研究。

一、細(xì)胞特性

1） 來(lái)源: C57BL/6小鼠 骨髓

2） 形態(tài)：上皮樣  貼壁和貼壁不牢（半貼壁半懸浮)混合生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

二、運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備RPMI 1640（推薦WS-P-0001）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加10ng/mL murine GM-CSF；雙抗，1%。

  血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)！！！！

1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上wan全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加wan全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。