A549細胞培養(yǎng)說明

一、細胞基本信息

來源：人非小細胞肺癌（NSCLC）組織。

類型：貼壁生長，上皮樣細胞。

應用：常用于癌癥、藥物篩選、毒理學及基因表達研究。

二. 培養(yǎng)基及試劑

基礎培養(yǎng)基：DMEM（高糖）或 RPMI-1640。

添加成分：

   10% 胎牛血清（FBS）。

   1% 青霉素-鏈霉素雙抗（可選）。

消化試劑 ：0.25% 胰酶-EDTA。

三、培養(yǎng)步驟

1、復蘇細胞：

   - 快速解凍（37℃水浴），離心后重懸于培養(yǎng)基，接種于培養(yǎng)瓶。

2、培養(yǎng)條件：

   - 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱。

   - 每2-3天換液，觀察細胞密度達80%-90%時傳代。

3、傳代操作：

   - 棄舊液，PBS清洗。

   - 加入胰酶消化1-2分鐘，顯微鏡下確認細胞脫落。

   - 加入含血清培養(yǎng)基終止消化，離心后按1:3至1:5比例分瓶。

四、注意事項

污染防控：嚴格無菌操作，定期檢測支原體。

細胞狀態(tài)：貼壁不良或空泡增多時需排查培養(yǎng)基或污染。

凍存：使用凍存液（含10% DMSO），逐步降溫后存于液氮。

常見問題：

一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，

首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混油。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下現(xiàn)察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸:

(2)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不直細胞生長;

(3)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除;

(4)血清等級不足以維持細胞良好的生長，更換高等級的胎牛血清。