1、不同的細胞，對培養(yǎng)環(huán)境的要求不一樣

這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。

尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結果是不好的。

所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度。

2、發(fā)現養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好

對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等，可以在傳代的時候進行如下操作：

首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入 3 mL 新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走。然后再加入 3 mL 的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。

注：巨噬細胞我們只吹打，不消化的。

其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10 分鐘觀察一次，20 分鐘，30 分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入 3 mL 新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。這就是二傳。

如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞形態(tài)。其中要注意結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。這個方法真的很好用。

3、培養(yǎng)基的量

這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶 12 mL，大方瓶14mL 的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。對于生長速度快的細胞，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。

培養(yǎng)基又該如何選擇呢？

經典/基礎培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據天然培養(yǎng)基的成分，用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養(yǎng)基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其他輔助成分，比如 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，這些都是應用非常廣泛的經典/基礎細胞培養(yǎng)基。

人胚腎細胞 HEK-293（293） MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人胚腎細胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人高轉移鼻咽癌細胞系 5-8F  1640+10%FBS+1%P/S    貼壁生長

人鼻咽癌細胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人鼻咽癌細胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人卵巢癌細胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S   

人卵巢癌細胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌細胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞 CoC1  1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明細胞癌細胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌細胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉移卵巢癌細胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮細胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細胞瘤細胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌細胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素

人卵巢癌細胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌細胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

倉鼠卵巢細胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮） CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中國倉鼠卵巢細胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

倉鼠卵巢細胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S

人高轉移肺癌細胞 95-D  1640+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細胞 A549  F12K+10%FBS+1%P/S   

 人肺癌細胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細胞熒光素酶標記 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S

人肺癌細胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S  

人肺癌細胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%（10mM）HEPES +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%hepes+1%PS

人經典小細胞肺癌細胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 細胞漲的慢2-3周發(fā)貨

人肺癌細胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS

人肺癌細胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細胞(淋巴結轉移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌細胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS

人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 [H460]  1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H524  1640+10%FBS+1%P/S

人大細胞肺癌細胞 NCI-H661[h661]  1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌細胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌 SBC-2  1640+10%FBS+1%P/S   

人小細胞肺癌細胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1% PS

小鼠肺癌細胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細胞瘤細胞 D283 Med  MEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細胞瘤細胞 D341 Med MEM+1%丙酮酸鈉+1%NEAA+10%FBS+1%P/S  

永生化人腦微血管內皮細胞 HCMEC/D3 內皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002）

人腦膠質瘤細胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S  

人腦膠質細胞瘤細胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人腦膠質瘤 SNB-19 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦膠質瘤 TJ905 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質母細胞瘤 U118MG（U-118MG） DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質母細胞瘤 U87MG MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

人腦星形膠質母細胞瘤+RFP U87MG+RFP MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

小鼠腦神經膠質母細胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦微血管內皮細胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S  

小鼠腦神經瘤細胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦神經瘤細胞熒光素酶標記 neuro-2a+luc MEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦膠質瘤細胞 C6 F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦膠質瘤細胞綠色熒光標記 C6+LUC F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦星形膠質細胞 CTX DMEM+10%FBS+1%P/S  

大鼠腦I型星形膠質細胞 CTX-TNA2 DMEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦間質細胞 DI TNC1 DMEM+10%FBS+1%P/S