細(xì)胞污染防治方法

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的污染，主要由操作不慎或使用了滅菌不*的耗材與試劑引入。最常見(jiàn)的有枯草桿菌、大腸桿菌、假單胞菌及白色葡萄球菌。鏡下形態(tài)則為長(zhǎng)桿狀、短桿狀和顆粒狀等。

左邊的就是比較典型的桿菌污染，一般桿菌會(huì)延軸向快速游動(dòng)，量少時(shí)培養(yǎng)基澄清。右圖是顆粒狀污染，一般培養(yǎng)基會(huì)渾濁或有白色沙狀沉淀。

好氧菌增殖分裂迅速，感染24h內(nèi)即可使培養(yǎng)基渾濁；厭氧菌在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)條件下增殖緩慢，需要較長(zhǎng)時(shí)間才會(huì)觀察到渾濁現(xiàn)象。

污染處理：由于國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)中抗生素使用泛濫，所以出現(xiàn)污染后加雙抗（青霉素&鏈霉素，Penicillin + Streptomycin）一般沒(méi)有效果。桿菌可選用100ug/ml慶大霉素處理一周，顆粒狀細(xì)菌可用25ug/ml環(huán)丙沙星處理一周，效果相對(duì)還不錯(cuò)。

2. 真菌污染

細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的污染真菌有：煙曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌等。

左邊這張是比較典型的霉菌污染的圖片，右圖是酵母污染，鏡下可以看到明顯的出芽形態(tài)。

污染處理：可用100ug霉素B/T25瓶，處理一周。

注：兩性霉素毒性較大，需要在細(xì)胞有50%以上且狀態(tài)沒(méi)受大影響前處理。

3.支原體污染

支原體的危害：支原體污染可以改變細(xì)胞的特性。例如部分支原體會(huì)快速消耗培養(yǎng)液中的精氨酸，與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)，從而使細(xì)胞的生長(zhǎng)速度減慢或停止；同時(shí)支原體還可以改變細(xì)胞的酶譜、細(xì)胞膜成分，造成細(xì)胞染色體異常或細(xì)胞病理性改變等。上述情況會(huì)嚴(yán)重影響到使用這些細(xì)胞所做實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)論不可靠。

（PCR法檢測(cè)細(xì)胞上清中的支原體污染）

支原體的預(yù)防與清除：由于支原體無(wú)法在鏡下直接看到，需要通過(guò)PCR法等進(jìn)行檢測(cè)才發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)污染后比較難發(fā)現(xiàn)。建議在養(yǎng)細(xì)胞每月檢測(cè)一次并結(jié)合每周抽檢，做到有污染早發(fā)現(xiàn)。對(duì)于正在進(jìn)行支原體去除處理的細(xì)胞建議每周必檢，直至出現(xiàn)陰性結(jié)果并至少維持一月。不同的細(xì)胞分開(kāi)處理，優(yōu)先處理“支原體陰性"細(xì)胞，后處理正在做去除處理的和受感染的細(xì)胞。同時(shí)，新引進(jìn)的細(xì)胞系都進(jìn)行支原體檢測(cè)，確保不給實(shí)驗(yàn)室?guī)?lái)新的污染。